Niedorozwinięte komórki T, nawroty i przeżycie w nabłonkowym raku jajnika cd

Komórki T zliczano ręcznie lub za pomocą analizy obrazu za pomocą kolorowego aparatu cyfrowego CoolSnap-Pro i oprogramowania Image-Pro Plus 4.1 (Media Cybernetics) w 15 do 20 polach o dużej mocy. Niedojrzałe komórki T oceniono odpowiednio jako 1+, 2+ lub 3+ (.5, 6 do 19 lub .20 komórek T na pole dużej mocy). Pośrednią immunofluorescencję stosowano do podwójnej immunodetekcji CD3 i cytokeratyny, CD3 i Ki-67, CD3 i CD83 oraz CD3 i CD45RO (patrz Dodatek Dodatek 2). Cytometrii przepływowej
Komórki z 10 świeżych próbek guza przygotowano i poddano czterokolorowej cytometrii przepływowej, jak opisano w innym miejscu, 27 przy użyciu cytometru przepływowego FACSCalibur z oprogramowaniem CellQuest 3.2.1fl (Becton Dickinson). W badaniach tych wykorzystano przeciwciała monoklonalne przeciwko HLA-DR (G46-6), CD3 (UCHT-1), CD4 (RPA-T4), CD8 (RPA-T8), CD16 (3G8), CD19 (HIB19), CD45 (HI30) , IgG1 i IgG2a (BD Pharmingen).
Ilościowa reakcja łańcuchowa polimerazy w czasie rzeczywistym
Całkowity RNA wyizolowano przez homogenizację z użyciem metody Trizol (Invitrogen), a następnie traktowanie DNase I (Invitrogen) i dalsze oczyszczanie za pomocą zestawu RNeasy (Qiagen). Jakość RNA została potwierdzona przez elektroforezę na formaldehydzie i żelu agarozowym. Doświadczenia z ilościową reakcją łańcuchową polimerazy w czasie rzeczywistym (PCR) przeprowadzono przy użyciu zestawów ABI Prism 7700 Analyzer i SYBR Green I PCR (Applied Biosystems). Komplementarny DNA znormalizowano względem dehydrogenazy gliceraldehydowo-3-fosforanowej. Startery do amplifikacji są wymienione w Dodatku Aneks 3 (dostępne wraz z pełnym tekstem tego artykułu na http://www.nejm.org).
Analiza statystyczna
Krzywe Kaplana-Meiera wykorzystano do oszacowania pięcioletnich wskaźników i porównano je ze statystykami log-rank. Zastosowano wielowymiarowy model proporcjonalnego hazardu Coxa w celu oszacowania skorygowanych współczynników hazardu. Opisowe analizy statystyczne przeprowadzono za pomocą oprogramowania SPSS28; analizy logistyczno-regresyjne, analizy przeżycia i analiza obszaru pod krzywą charakterystyki operacyjnej odbiornika przeprowadzono za pomocą oprogramowania SAS .29
Wyniki
Wzorce infiltracji komórek T w raku jajnika
Ryc. 1. Ryc. 1. Wzorce infiltracji limfocytów T w raku jajnika. Panel A pokazuje podwójną immunofluorescencyjną detekcję cytokeratyny (fluoresceina, zieleń) i CD3 (czerwień Texas, czerwona) demonstrując organizację komórek nowotworowych z dodatnim poziomem cytokeratyny w dobrze zdefiniowanych wysepkach nowotworowych i obecność limfocytów T naciekających nowotwór CD3 + zarówno w wysepkach nowotworowych i w podścielisku okołozębowym. Panel B pokazuje, że limfocyty T pojawiają się w wysepkach nowotworowych, jak również w podścielisku guza; istnieje obfitość śród-nowotworowych limfocytów T. W panelu C nie wykryto wewnątrzkomórkowych limfocytów T: limfocyty T są ograniczone wyłącznie do stroma okołozaporowego w tej próbce. W Panelu D analiza ilościowa reakcji łańcuchowej polimerazy w czasie rzeczywistym konstytutywnego łańcucha CD3. receptora komórek T w 16 nowotworach zawierających limfocyty T i 10 guzów bez komórek T ujawniła nadekspresję CD3. w tym pierwszym, odzwierciedlając większą liczbę Komórki T. Oś y przedstawia ekspresję CD3. w odniesieniu do informacyjnego RNA dehydrogenazy gliceraldehydu-3-fosforanu (mRNA)
[hasła pokrewne: portal dla lekarzy, jak wygląda badanie u lekarza medycyny pracy, gumtree otwock ]
[podobne: gumtree otwock, nasiadówka z kory dębu, popękane naczynka w oku ]